vero细胞冻存方法

　　vero细胞培养操作

　　换液周期：2-3天

　　培养基体积：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

　　传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

　　传代方法：

　　1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

　　2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

　　3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

　　4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

　　5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

　　6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

　　7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

　　8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

　　注意事项：不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间

　　消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

　　冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

　　冻存规格：200-300万/ml，1ml每管

　　vero细胞冻存方法：

　　1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

　　2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

　　3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

　　注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

　　vero细胞

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