NovoRec?PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）

NovoRec? PCR一步定向克隆试剂盒(无缝克隆)是近岸蛋白质科技研发的产品。该产品可以不依赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至20分钟，阳性率达到95%以上，让您轻松完成实验。
　　反应原理
　　· 产品组成、稳定性及保存条件
　　1、产品组成
　　2、稳定性：此Kit在4℃保存3天不影响使用效率。
　　3、保存条件：收到后请立即离心；此kit可在-20℃长期保存，避免反复冻融。
　　· 使用方法
　　A.线性化载体的获得
　　线性化载体可以通过两种方法获得，不管采取哪种方法，zui终线性化载体的浓度需]15ng/ul。(高浓度的载体有利于提高效率)。
　　1、酶切
　　选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，并且5’端突出，3’端突出或平末端均适用本Kit。为了提高阳性率，我们建议您采取双酶切载体。
　　2、PCR
　　选取合适的位点，设计正向和反向引物，引物长度一般在18-20bp左右，一般载体长度均大于3kb，建议用高保真的聚合酶扩增（推荐使用novoprotein pfu DNA 聚合酶，货号：E002）。为了避免模板质粒DNA对后续试验的影响，建议载体酶切后再用PCR扩增，自连背景更低，阳性率更高。
　　B.目的片段获得
　　目的片段通常通过PCR获得。引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与线性化载体的两端*，特殊应用引物设计请参照技术手册。 为保证PCR扩增的特异性及灵敏度，请尽可能选用pfu等高保真酶（推荐使用novoprotein pfu DNA 聚合酶，货号：E002）。PCR每条引物长度至少在35-40bp，包括5’端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp，（注意事项：如果是表达载体克隆构建，引物设计完全后，请注意检查读码框的正确）。
　　引物设计方法：
　　使用NovoRec PCR一步定向克隆试剂盒时，引物设计是很重要的，在设计引物时同样要遵循引物设计的基本原则，只不过上下游引物要加上15-18bp的载体同源序列。
　　GeGeneRec PCR一步定向克隆试剂盒
　　http://www.gegenetech.com/Products-18081465.html
　　https://www.chem17.com/st270236/product_18081465.html