RNAi干扰检测

NAi干扰检测 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。
　　RNAi干扰检测 主体实验：
　　一、成功将siRNA表达载体导入目的细胞
　　如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺***或慢***载体，利用***载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。
　　二、设置好分组和对照
　　按照nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照：
　　⒈转染试剂对照（监控转染及培养条件对结果的影响）；
　　⒉nonsense siRNA对照（监控外源核酸本身对结果的影响）；
　　⒊positive siRNA对照（监控假阴性）；
　　⒋技术重复对照（也叫off-target 对照，也就是利用至少2个靶点的siRNA同时实验，2个siRNA互为off-target control，当两者的表型相同时，才有可能是特异性的knockdown效应）；
　　⒌rescue 对照（knockdown之后做超表达，看是否有性状的逆转，这也是为了说明knockdown的特异性）；6.全表达组扫描对照（就是转录/表达芯片扫描，以zui终确定表型不是由于off-target造成）。
　　实际实验中，全表达组扫描对照很少有文献涉及。其它几个对照中，1,2两种对照即所谓的空白细胞对照、NC对照，基本是所有杂志都要求具备的。4,5两种对照，主要是为了解决off-target效应，选做一种即可，一般建议选5，涉及的实验即所谓的“RNA干扰回复实验”，
　　RNAi干扰检测
　　https://www.chem17.com/st270236/erlist_1221756.html
　　http://www.gegenetech.com/SonList-1221756.html